


lipoJet2000轉染試劑是一種多用途轉染試劑,可在各種貼壁和懸浮細胞系中提供高效轉染。lipoJet2000轉染試劑可轉染siRNA、shRNA、質粒DNA等
以轉染六孔板的貼壁細胞為例:
1,接種細胞。轉染前一天將細胞接種至六孔板內。細胞接種數量視其生長速度而定,一般為1×106個細胞。轉染時要求細胞匯合度為90~95%。轉染前兩小時對細胞進行換液。
2,將4ug的質粒DNA加至250ul的OPTI-MEM培基中,混勻。
3,將10ul的LipoJet2000加至另外250ul 的OPTI-MEM中,輕輕混勻,室溫靜置5分鐘。
4,將DNA懸液和LipoJet2000懸液混合,總體積500ul,輕輕混勻,室溫靜置20分鐘。
5,將DNA和LipoJet2000混合液加至六孔板的孔內,前后左右晃動孔板混勻,置于培養箱中培養。
6,轉染4-6小時后,細胞換液,每孔2ml培基。
7,轉染18-48細胞后,收集細胞檢測表達,或加入抗性培基篩選穩定表達克隆。
注: 1. 如果沒有OPTI-MEM培基,用培養細胞的無血清基礎培基替代也可以。
2. 該說明為一個孔的用量,同時轉幾個孔時按需加倍。若轉染其他類型孔板,DNA和LipoJet2000用量參見試劑盒說明書中的表格。可根據實際質粒和細胞的轉染效率,分不同量摸索最佳DNA和LipoJet2000的混合比例。
3.轉染4-6小時后也可以不換液,但由于LipoJet2000具有一定的細胞毒性,作用時間過長可能使某些細胞出現大量死亡現象,建議換液。
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